美洲大蠊对肺癌细胞的影响在实验中的表现是
美洲大蠊提取物对肺癌细胞H作用
1.2.2细胞周期检测取对数生长期H细胞,设阴性对照组,阳性对照组(顺铂10μg/mL)和美洲大蠊组(10、20、40μg/mL)。培养24h后,0.25%胰酶消化,收集细胞(r/min离心5min)。
按照试剂盒说明操作,70%乙醇4℃固定过夜,r/min离心5min,沉淀细胞,磷酸盐缓冲液洗细胞(r/min,5min)2次,碘化丙啶染色。冰浴避光存放,1h内用流式细胞仪检测。1.2.3细胞凋亡检测细胞分组与处理同1.2.2,按照试剂盒说明操作,采用AnnexinV—FITC/PI双染,避光染色15min,1h内用流式细胞仪分析检测。1.2.4线粒体膜电位检测细胞分组与处理同1.2.2,按照试剂盒说明操作。加入JC—1染色工作液体,细胞培养箱中孵育20min。g4℃离心4min,沉淀细胞,弃上清。
用JC—1染色缓冲液洗涤2次,最后用JC—1染色缓冲液重悬,流式细胞仪进行分析。以绿色荧光细胞的百分率表示线粒体膜电位变化,绿色荧光细胞的百分率升高表明线粒体膜电位下降。1.2.5美洲大蠊对H细胞Bax、Bcl-2蛋白表达影响采用蛋白免疫印迹法,细胞分组与处理同1.2.2,4℃下加入裂解液,裂解30min。
10%聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白,半干法将蛋白转印至聚偏氟乙烯膜上,加入1:稀释一抗,4℃孵育过夜。再加入1:稀释二抗,孵育1h后显色、照相并分析。
1.3统计分析数据用x±s表示,采用SPSS17.0软件进行分析。单因素方差分析组间差异,最小显著差法进行组间两两比较,以P<0.05为差异有统计学意义。
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